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国家蛋白质科学研究(北京)设施清华基地蛋白质制备与鉴定平台和美国国立卫生研究院Peter Schuck团队合作发表技术成果
2020/07/14 86

2020年7月2日,国家蛋白质科学研究(北京)设施清华基地蛋白质制备与鉴定平台和美国国立卫生研究院Peter Schuck 团队合作在《Current Protocols in Protein Science》杂志上在线发表了题为“Quantitative Analysis of Protein Self-Association by Sedimentation Velocity”最新技术成果。

本文利用分析超速离心技术(Analytical Ultracentrifugation,AUC)的沉降速率(SV)方法,以常见商用蛋白β-lactoglobulin为模型,准确测定了其自聚集平衡结合常数,为蛋白质自聚集研究提供了一种完整的实验技术方法。分析超速离心(Analytical Ultracentrifugation,AUC)是检测生物大分子溶液中生物物理性质的重要技术,其中沉降速率分析(SV-AUC)得到的的沉降系数分布,可以用来计算蛋白质复合体的化学计量比和结合亲合力,被广泛应用于多种相互作用关系的研究中。蛋白质的自聚集(Self-Association)是广泛存在的一种蛋白质间相互作用现象,其单组分的性质导致无法确定单个聚集状态的特征,采用其他互作设备进行亲和力分析具有一定的难度。SV-AUC可以在同一溶液中同时分析样品不同聚合状态的性质,是研究蛋白质自聚集过程的经典方法,可以测定从pM到mM的亲和力。本技术方法以β-lactoglobulin的同型二聚作为模型系统,对仪器校准,SV-AUC实验,数据分析,结果统计评估等方面进行了详细介绍,为蛋白质自聚集体系的研究提供了一个标准方案,对AUC技术在自聚集方面的应用提供了有效指导,在国内外AUC技术的应用与发展中起到极大的促进作用。 


Sedimentation velocity studies of the self-association of βLGB.


在自然科学领域,Protocol (科学实验报告)指的是一种预定义的书面流程介绍,用于标准化实验室方法,确保实验结果可被成功复制和重现。《Wiley Current Protocols》的编辑委员会由生命科学研究领域的杰出科学家组成,所有内容均为同行评审,并且被Scopus和PubMed收录,是近30年来实验室科学报告的主要来源。《Current Protocols in Protein Science》介绍了大量研究和量化蛋白质相互作用的方法,以及许多蛋白质分析和蛋白质工程相关的实验室流程,适用于各种从事蛋白质表达纯化、鉴定与相互作用研究的科研工作者。

Peter Shuck实验室多年来一直致力于AUC数据分析的实验方法和数据分析算法优化,其领导的NIH团队编写的SEDFIT系列免费分析软件,是AUC用户采用最多的数据分析软件。国家蛋白质科学研究(北京)设施是作为国家重大科学基础设施,清华基地主要负责以电镜为主的复合结构蛋白质组解析系统及功能蛋白质组研究系统。清华基地下设11个子平台,其中蛋白质制备与鉴定平台面向校内外提供4种表达体系的蛋白质表达纯化相关服务,以及蛋白质波谱学分析、稳定性分析、相互作用分析等性质鉴定技术支撑。在蛋白质相互作用研究方面,平台配备各种原理的相互作用检测仪器设备,如:分析超速离心机(AUC),等温滴定量热仪(ITC),BLI膜干涉生物分子相互作用仪,SPRi表面等离子共振成像大规模生物分子相互作用仪,微量热泳动仪(MST)以及最新购置的SPR分子相互作用仪Biacore8K plus等,目前已全部投入使用,为各种类型的生物分子相互作用研究提供技术支持。

原文链接:https://currentprotocols.onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1002/cpps.109

了解更多国家蛋白质科学研究(北京)设施清华基地蛋白质制备与鉴定平台请访问以下网站:http://phoenix.tsinghua.edu.cn/index.php?c=show&id=85

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