作者：曹慧珍

能看出左图是杨桃吗，感觉和中间的海星是亲戚吧！看右面杨桃的图，就不会有这样错误认知了吧。如果是一个可旋转的图，从各个角度观察模型，我们是不是对它认识的更清晰！

观察尺度缩小千万倍

我们在显微镜下观察样品结构时，每一张XY的平面图看到的都只是在该焦面和特定角度看到的图，很容易造成视觉错觉，丢失真实的样品信息。

XY二维图是一堆杂乱无章的点，三维采集创建后发现是有规律的螺线管结构。

XY二维图片观察相交的两条微丝，空间上没有交点。

所以说为了更精准的实验结果，我们需要采集三维图像。

三维图像采集方法

1、按照采集二维图像的方法，先调整好针孔、Laser、HV、Scan size/speed等参数，决定图像的获取条件。

2、在ND Acquisition窗口勾选Z，进入三维图像采集模式。

3、点击Reset按钮，清除之前的记录。

4、Live或Find mode预览，边观察图像边调节焦面（微调模式），点击Top按钮，确定三维图像的顶面。

5、继续预览，反方向调节焦面，信号增强再减弱，点击Bottom按钮，确定三维图像的底面，停止预览。

6、输入Step

7、根据需要，勾选Save to File，在保存的同时获取图像。

8、点击Run now，开始采集Z序列图像。

Top、Bottom、Step的选择

Step的右侧显示了当前成像参数下的系统推荐值（最小值），这个值是共聚焦显微镜光切厚度的1/2。如果按推荐值扫描，每个信息扫描2遍，每次50%的overlap，后期创建三维结构更精细；按推荐值的两倍扫描，所有信号都采集1遍，也没有丢失信息，大于2倍则会丢失一些图像信息。我们建议step设置为推荐值的1-2倍之间。

top和bottom的设置与实验目的有关，如果为了观察三维结构，top和bottom设置时预览状态最好信号完全消失，保证结构的完整性；如果仅为了观察Z轴投影图，top和bottom可以设置在信号开始不清晰的焦面，节约采集时间。

是不是很简单，快来试一试吧！

本文章版权归清华大学生物医学测试中心尼康影像中心所有