作者：冯倩倩

激光片层扫描显微镜（Light SheetFluorescence Microscopy）是一种新型显微系统，具有成像速度快、多视角成像、成像视野大、观察时间长等优点，可以对斑马鱼、果蝇、线虫、拟南介等荧光标记的模式生物进行长时间观察；同时，该设备具有光损伤小、光毒性和光漂白性小等特点，适合胚胎形成过程中器官发育基因表达的时间、空间模式荧光成像。还可利用荧光标记，测定样本快速动态变化，固定样本的快速精细三维结构成像，如：透明化的小鼠胚胎、脑、肺、肝脏、肾脏、胰腺、卵巢等组织器官的实时成像。

一、confocal microscope和lightsheet microscope的区别

传统激光扫描共聚焦显微镜和激光片层扫描显微镜在成像原理、样品制备、载物形式、适用样品等方面均有较大不同，见下图。

Confocal和lishtsheet原理及lightsheet载物台

二、lightsheet样品制备方法

1. 包埋 Embedded Samples

可以将部分样品包埋在1-4%浓度的低熔点琼脂糖中，不同浓度的琼脂糖其稳定性不同，对活体样品的影响也不同。

适合样品：斑马鱼、果蝇、线虫、拟南介等荧光标记的模式生物。

包埋尺寸：平台配有不同规格的毛细管和1ml注射器，样品大小0.23mm-3.06mm，介于毛细管和注射器直径的1/3-2/3之间，此时稳定性和成像效率均比较高。

包埋样品合适尺寸

2. 悬挂 Hanging Samples

大组织透明化样品可以通过悬挂的方式放置在样品载物台上，样品最大尺寸是1cm*1cm*1cm。

适合样品：水溶性试剂透明化的小鼠胚胎、脑、肺、肝脏、肾脏、胰腺、卵巢等。

上样方式：平台配有不同形式的样品粘托和样品托盘，可以将样品通过粘贴悬挂或者托挂的方式放置在载物台上，没有固定形式，大家集思广益。

悬挂样品模式图

悬挂样品实物图

3. 围封 Enclosed Samples

由于高浓度的琼脂糖浓度会影响部分活体样本的发育和状态，琼脂糖浓度太低又会影响样品的稳定性，此时，我们可以选择将样品围封在FEP管中。

适合样品：折射率和FEP、琼脂糖相似的样品，如斑马鱼、果蝇、线虫、拟南介等。

样品大小：平台配有不同规格的FEP管，具体围封方式类似于包埋方式。

围封样品模式图

lightsheet样品制备的方法很多，不同尺寸的样品对应不同的处理方法，适用但不局限于以上介绍的方法，大家如需试用，还需集思广益，开放思维。但其好处也是多多，成像视野大、拍照速度快、光漂白性小、观察时间长，不妨也来试试吧！

本文所有图片均来自今年lightsheet培训讲座的内容，感谢Zeiss公司对平台培训工作的支持！

本文章版权归清华大学生物医学测试中心共享仪器平台所有